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淺談HPLC法測(cè)定復(fù)方靈芝顆粒中五味子甲素的含量
【關(guān)鍵詞】 復(fù)方靈芝顆粒
摘要:目的 建立復(fù)方靈芝顆粒中五味子甲素含量測(cè)定的方法。方法 用高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件為：C18柱，(5 μm,250×4.6 mm)，流動(dòng)相為甲醇水（體積比75∶25），檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。結(jié)果 五味子甲素在0.1608～6.432 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（R=09996），平均加樣回收率為99.27％，RSD=1.02%（n＝6）。結(jié)論 該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，建立的定量方法可用于復(fù)方靈芝顆粒質(zhì)量的控制。
關(guān)鍵詞:HPLC；復(fù)方靈芝顆粒；五味子甲素
Abstract: Objiective To establish a method for the content determination of deoxyschizandrin in complex Lingzhi granule. Methods HPLC was performed on an ODS-C18 column (5μm,250 mm×4.6 mm) using methanolwater (75∶25) as the mobile phase under the detection wavelength of 254 nm. Results The linear range of deoxyschizandrin was 0.1608-6.432μg. The mean recovery was 99.27％ with RSD 1.02％（n＝6）.Conclusion This method is simple,reproducible and accurate for the content determination of deoxyschizandrin in complex Lingzhi granule.
Key words:HPLC；complex Lingzhi granule；deoxyschizandrin
復(fù)方靈芝顆粒具有保護(hù)肝臟降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶和退黃作用，用于急性傳染性黃疸肝炎，遷延性肝炎，慢性肝炎，單項(xiàng)谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高等癥，其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)2冊(cè)，該藥由靈芝、柴胡、五味子和郁金4味藥材組成，五味子為方中主藥之一，為了提高及控制復(fù)方靈芝顆粒的質(zhì)量，本文對(duì)五味子中的五味子甲素進(jìn)行含量測(cè)定，建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。
1 儀器和試藥
日本島津LC-10AT HPLC儀； N2000色譜工作站。甲醇（色譜純，Merck公司出品）；雙蒸餾水（自制），其他試劑為分析純。五味子甲素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所（供含量測(cè)定用，批號(hào)為110764-200107），復(fù)方靈芝顆粒（自制，批號(hào)：20050201、20050202、20050203、20050204）。
2 方法與結(jié)果 1 色譜條件的選擇
色譜柱:Inertsil (C18,5 μm,250 mm×4.6 mm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流動(dòng)相：甲醇-水（75∶25）,流速：1 mLmin-1；進(jìn)樣量10 μL；柱溫：30 ℃。取一定濃度樣品進(jìn)行測(cè)定，此條件下所測(cè)五味子甲素與樣品中其他組分色譜峰完全分離，色譜峰形對(duì)稱而尖銳（拖尾因子T＝1.00），按五味子甲素峰計(jì)算，理論板數(shù)不小于2000。 2 陰性對(duì)照試驗(yàn)
取處方量以相同工藝制備的陰性對(duì)照（缺五味子），按上述方法測(cè)定，結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜圖中在與五味子甲素對(duì)照品色譜圖相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，結(jié)果表明陰性對(duì)照（含靈芝、柴胡和郁金三味藥材）用相同制備方法下提取的成分在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)吸收，故其他成分其他對(duì)五味子甲素測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。 3 樣品溶液制備 3.1 對(duì)照品溶液的制備
取五味子甲素對(duì)照品1005 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解后稀釋至刻度,搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液(40.2 μgmL-1)。2.3.2 供試品溶液的制備
取本品約4 g，研細(xì)，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，加氯仿約40 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，殘?jiān)勇确?0 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，合并兩次濾液，將容器和濾紙多次洗滌液并入濾液中，揮干,殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液。 4 線性關(guān)系考察
精密吸取五味子甲素對(duì)照品貯備液 (0.402 mgmL-1) 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別取上述對(duì)照品溶液各10 μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(m)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=1 194 733m＋59 047，r=0.999 6。其線性范圍為0.402～6.432 μg，結(jié)果表明在此范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 5 精密度試驗(yàn)
取上述對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，其RSD=0.75%（n=6）。 6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取上述對(duì)照品溶液10 μL，分別在0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定，其RSD=0.98%（n=6）,表明樣品在12 h以內(nèi)是穩(wěn)定的。 7 重復(fù)性試驗(yàn)
取供試品（批號(hào)：20050201）6份，每份約4 g，按“23”項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，測(cè)出五味子甲素平均含量為15.3 mgg-1，RSD=1.21%（n=6）。 8 加樣回收試驗(yàn)
取已知含量供試品（批號(hào)：20050201，含量15.3mgg-1），加入定量的五味子甲素對(duì)照品溶液，依樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，計(jì)算其回收率=99.27%，RSD=1.02%（n=6），結(jié)果見(jiàn)表1。表1 回收率測(cè)定結(jié)果（略） 9 樣品測(cè)定
分別吸取對(duì)照品和供試品溶液各10 μL，按上述方法測(cè)定供試品中五味子甲素含量，其結(jié)果（n=3）為：批號(hào)20050201為15.3 mgg-1、批號(hào)20050202為14.2 mgg-1、批號(hào)20050203為16.5 mgg-1和批號(hào)20050204為13.7 mgg-1。
3 討 論 1 本品由靈芝、五味子等4味藥材組成，曾經(jīng)對(duì)靈芝所含腺苷等成分進(jìn)行測(cè)定［1］，但其含量較低（低于0.01%），干擾嚴(yán)重，不宜作為指標(biāo)成分；結(jié)果選用五味子中的五味子甲素作為定量指標(biāo)，用HPLC法測(cè)定其含量，結(jié)果陰性無(wú)干擾，且方法穩(wěn)定可靠，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好。 2 測(cè)定時(shí)應(yīng)注意掌握好樣品前處理，曾經(jīng)采用索氏提�。�2］，加熱回流，超聲提取對(duì)樣品進(jìn)行處理，結(jié)果以超聲提取兩次較為完全，操作簡(jiǎn)單快捷。 3 經(jīng)過(guò)比較不同比例的甲醇水（65∶35）、（75∶25）、（85∶15），乙腈-水-冰醋酸（70:30:0.1）［3］等流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)本品中五味子甲素與雜質(zhì)的分離度與保留時(shí)間，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相甲醇水（75∶25）能保證所測(cè)本品與雜峰完全分離（分離度R≥1.5），色譜峰形對(duì)稱而尖銳（拖尾因子T＝1.00）。
參考文獻(xiàn):
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